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农bacillus转化法

　　农bacillus包括引起植物冠瘿瘤的根***农bacillus和引起发根病的发根农杆1菌。根***农杆1菌和发根农bacillus有相似的遗传背景。在农bacillus介导的转化中，80%左右是由根***农bacillus介导的，大约20%是由发根农bacillus介导的。这里主要介绍根***农杆1菌介导的转化。

　　根***农bacillusTi质粒上有一段转移DNA（T-DNA）和Vir区，在农bacillus侵染植物时，这段T-DNA可以插入到植物***组中，使其携带的***在植物中得以表达。Vir区共24个***，它们表达的蛋白与T-DNA的加工和转移有关。

典型的腺病毒载体系统如：穿梭质粒pCA13/腺病毒***组质粒pBHG11/包装细胞293细胞。pCA13/的HCMV IE启动子－多克1隆位点－SV40 AN（poly A）构成外源***的表达盒，该表达盒的插入使腺病毒E1***缺失，但是保留其两端侧翼序列（左侧的1~3bp的ITR，右侧从3.5kb到末端的维持病毒装配和活力必须的蛋白IX的***），也保留了腺病毒的包装信号

φ（194~358bp）；pBHG11则保留了腺病毒***组的绝大部分，但是缺失了包装信号φ、0.5~3.7图距（mu）部分的E1区、77.5～86.2mu的E3区，293细胞是整合有Ad5 E1***的人胚shen细胞系。pBHG11因为缺失包装信号及E1区而不能copy，pCA13带有包装信号及E1的侧翼序列，但是缺失E1区及腺病毒绝大部分***组，同样不能copy。外源目的***插入pCA13后，与pBHG11共转染，进入293细胞。pCA13与pBHG11在细胞内发生同源重组，同时，293细胞提供E1蛋白，从而包装产生腺病毒颗粒。该病毒的蛋白质外壳同野1生型腺病毒相似，具有同样的感1染力进入靶1细胞的能力，但是***组DNA的E1区被外源目的***取代，即进入靶1细胞后病毒不能copy，但可以表达目的蛋白。

腺病毒的研究简史

腺病毒对啮齿类动物有致***能力，或能转化体外培养的啮齿类动物细胞。使细胞转化只需要腺病毒***组的一部分，这些***位于***组的左端，约占整个***组的7%～10%。尽管腺病毒分布很广，但对***不出现致***性。***细胞是一类允许细胞(permissive cell)，即这类细胞允许感1染入1侵的病毒在细胞内copy增殖，***后细胞裂解died而释放出大量1子代病毒。在体外培养的多种***肿1瘤细胞中均未查出腺病毒颗粒，但在人的1号染色体上有adl2的整合位点，这意味着***细胞对于腺病毒也可能是非允许细胞，即这类细胞在病毒感1染后，病毒不能在细胞内copy增殖，但可整合在受感1染细胞的***组内。这些细胞被病毒转化，表型发生改变，且可在体外期地培养传代。    

***导入细胞常用方法

不同的载体在不同的宿主细胞中繁殖，导入细胞的方法也不相同。

由于外源DNA的进入而使细胞遗传性改变称为转化，早在1943年，***ery等就发现***肺1炎双球菌的DNA与***肺1炎双球菌共培养后产生***性的肺1炎双球菌后代的转化现象。但DNA进入细胞的效率很低，在分子生物学和***工程工作中可采取一些方法处理细胞，经处理后的细胞就容易接受外界DNA，称为感受态细胞，再与外源DNA接触，就能提高转化效率。例如大肠杆1菌经冰冷C***2的处理，就成为感受态***，当加入重组质粒并突然由4℃转入42℃作短时间处理，质粒DNA就能进入***；用高电压脉冲短暂作用于***也能显著提高转化效率，这称为电穿孔（electroporation）转化法