RNA上样Buffer免费咨询「在线咨询」

RNA病毒检测***盒用于定性检测和分析RNA病毒和RNA分子，特别适合检测病毒等此类病毒。

组分1. ConviFlex? RT-Taq Mix的冻干粉包含：MuLV逆转录酶、Taq聚合酶及dNTP。

其中MuLV逆转录酶，来自小鼠白血1病病毒（M-MuLV）并经过***修饰。

这里的Taq聚合酶另兼具热启动功能。

此Taq酶在室温下，活性被抗1体所***，当温度达到70°C以上时，才会被完全激1活。

在70°C 以下时，由于Taq酶没有完全活化，因此实验不会产生非特异性PCR产物和引物二聚体。热启动Taq酶的使用可使PCR具有更高的特异性和灵敏度。

提取DNA常用的方法

　　一.酚抽提法：先用蛋酶K、SDS破碎细胞，消化蛋白，然后用酚和酚-氯DNA大小为100-150kb

　　二.甲酰胺解聚法：破碎细胞同上，然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合，再透析获得DNA可得DNA200kb左右。

　　三.玻璃棒缠绕法：用盐酸胍裂解细胞，将裂解物铺于乙醇上，然后用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅，DNA沉淀液绕于玻棒。生成DNA约80kb。

　　四.异丙1醇沉淀法：基本同1法，仅用二倍容积异丙1醇替代乙醇，可去除小分子RNA(在异丙1醇中可溶状态)

　　五.表面活性剂快速制备法：用Triton X-100A或NP40表面活性剂破碎细胞，然后用蛋白酶K或酚去除蛋白，乙醇沉淀或透析。

　　六.加热法快速制备：加热96℃-100℃，五分钟，然后离心后取上清，可用于PCR反应。

　　七.碱变性快速制备：先用NaOH作用20分钟，再加HCI中和，离心后取上清，含少量DNA。

为什么用无水乙醇沉淀DNA

　　用无水乙醇沉淀DNA，这是实验中较常用的沉淀DNA的方法。乙醇的优点是可以任意比和水相混溶， 乙醇与核酸不会起任何化学反应，对DNA很安全，因此是理想的沉淀剂。

　　DNA溶液是DNA以水合状态稳定存在，当加入乙醇时，乙醇会夺去DNA周围的水分子，使DNA失水而易于聚合。一般实验中，是加2倍体积的无水乙醇与DNA相混合，其乙醇的***终含量占67%左右。 因而也可改用95%乙醇来替代无水乙醇(因为无水乙醇的价格远远比95%乙醇昂贵)。

　　但是加95%的乙醇使总体积增大，而DNA在溶液中有一定程度的溶解，因而DNA损失也增大， 尤其用多次乙醇沉淀时，就会影响收得率。折中的做法是初次沉淀DNA时可用95%乙醇代替无水乙酵， 后面的沉淀步骤要使用无水乙醇。也可以用0.6倍体积的异丙1醇选择性沉淀DNA。一般在室温下放置15-30分钟即可。