***DNA纯化在线咨询 武汉友名生物公司

小分子类物质包含多肽、天然小分子、化学合成小分子等一系列的物质，被广泛用于medicine等各个领域。以往小分子的定量检测主要通过气相和液相色谱完成，存在周期长，检测仪器价格昂贵等多方面的不足。那么immune检测技术可以用于定量检测小分子吗？

免1疫检测***盒的技术基础就是抗原和抗1体的特异性结合，小分子特异性抗1体的制备即是小分子immune检测***盒制备的关键之处。小分子由于分子量小，结构简单，在免1疫学上划归为半抗原（Hapten），即只有immune反应性而没有immune原性的一类物质，不能直接刺激机体产生antibody但是却拥有和antibody结合的特性。随着抗1体制备技术的发展，小分子特异性抗1体的制备技术显得更为多元化

水中微生物DNA提取***盒，样本制备步骤。

步骤1. 样本过滤

1.1 从***盒中小心取出滤膜。用水样润湿滤膜。

1.2 将滤膜放置在滤器中，并过滤必要体积的水样。

步骤2. 菌体裂解

* 提前准备：预先将恒温仪设置到70℃，将恒温箱设置到37℃。

2.1将样本过滤后的滤膜翻转放置到***盒提供的IncubationDish（平皿）中。

2.2 吸取2mllysis buffer（裂解液），并加到滤膜上。

2.3 将滤膜浸泡在裂解液中，小心摇匀平皿并在37°C孵育30分钟。

2.4 用平皿中的裂解液冲洗滤膜，并摇晃平皿10秒钟。

2.5 将平皿中的400μl裂解液转移至IncubationTube（孵育管），70°C孵育10分钟。

2.6 样本短暂离心，并加入400μl Binding Buffer（结合液），立即涡旋充分混匀，以防止DNA沉淀。请勿离心样本，并立即进行下一步。

步骤3. DNA提取

3.1 将步骤2.6中的混合液（~800μl）转移到CollectionTube（收集管）内的SpinColumn（离心柱）中，小心液体不要沾到离心柱的边缘。

3.2 离心柱离心≥10000× g，1分钟。弃掉收集管中的液体。重新将离心柱插到原有的收集管中。

3.3 离心柱中加入500μl洗液1。离心≥10000×g，1分钟。弃掉收集管中的液体。重新将离心柱插到原有的收集管中。

3.4 离心柱中加入500μl洗液2。离心≥10000×g，1分钟。弃掉收集管中的液体。将离心柱插到一个新的收集管中。

3.5 ***大速度离心3分钟，以去除残留的洗液2。

3.6 弃掉收集管。

3.7 吸取60μl已70℃预热的洗脱液，直接加到离心柱的硅胶膜上。硅胶膜表面应全部覆盖洗脱液。

3.8 室温静置2分钟，然后离心8000×g，2分钟，以洗脱DNA。

3.9 样本保存管中的洗脱液即包含DNA，可直接用于PCR，或储存在2~8℃，可存放1周。长期储存是在≤-18℃。

回收产物的检测

1.紫外分光光度计法检测DNA在OD260处有明显吸收峰，当OD260=1时，相当于大约50 ng/μL双链DNA、40 ng/μL单链DNA。OD260/OD280≈1.6~1.9时，说明DNA纯度较高。若洗脱时不用洗脱缓冲液，而是用去离子水，会使比值偏低，因为离子的存在会影响吸光度。但不表示纯度低。

2.SYBR法检测取回收产物1 μL，与1 μL SYBR染料混匀，于荧光透1视仪下观察是否有黄绿色荧光。

3.琼脂糖凝胶电泳法检测取回收产物5 μL，与10×Loading Buffer混匀，DNA Marker加5 μL，电泳后凝胶成像观察。5 μL DNA Marker相当于每个条带50 ng DNA，观察目的条带亮度大致为Marker的两倍，则大致估算其浓度约为20 ng/μL。