双***表达载体免费咨询「友名生物」

目前，传统的获得多***转基yin植株的方法包括共转化，再转化W及杂交。但是运 些传统方法的缺点是共转化的两个或多个***的转化效率是不可控的，每个***在目标***组的插入位置也是不一样的，而***分离会导致不稳定的遗传后代。另外再转化W及杂 交都是耗时的过程。

而为了克服运些缺点，具有单个或者多个转录盒子的多***载体应运而生并成功 应用于多个研究，但是运些多***表达载体的应用没有得到广泛的推广应用。因为大部分 的方法需要亚克1隆W至于克1隆所耗时间拉长;没有标签或者报告***与目标***相连，运 样就导致蛋白或者***的鉴定比较困难；另外，某些方法如采用同尾酶构建多***载体的方法受限于可用的酶的数量不多运个问题。所W构建多***载体需要根据研究目的而设计。

微量凯氏（kjeldahl）定氮法

样品与浓1***共热。含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与***作用，变成***氨。经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。若以甘氨酸为例，其反应式如下：

NH2 CH2 COOH+3H2 SO4 ――2CO2 +3SO2 +4H2O+NH3 (1)

2NH3 +H2 SO4 ――(NH4 )2 SO4 (2)

(NH4 )2 SO4 +2NaOH――2H2 O+Na2 SO4 +2NH3 (3)

反应（1）、(2)在凯氏瓶内完成，反应（3）在凯氏蒸馏装置中进行。为了加速消化，可以加入CuSO4作催化剂，K2SO4以提高溶液的沸点。收集氨可用硼酸溶液，滴定则用强酸。实验和计算方法这里从略。计算所得结果为样品总氮量，如欲求得样品中蛋白含量，应将总氮量减去非蛋白氮即得。如欲进一步求得样品中蛋白质的含量，即用样品中蛋白氮乘以6．25即得。

蛋白质测定***

（1）标准蛋白质溶液：用标准的结晶牛血1清清蛋白（bsa）或标准酪蛋白，配制成10mg/ml的标准蛋白溶液，可用bsa浓度1mg/ml的a280为0.66来校正其纯度。如有需要，标准蛋白质还可预先用微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，计算出其纯度，再根据其纯度，称量配制成标准蛋白质溶液。牛血1清清蛋白用H2O 或0.9%N***配制，酪蛋白用0．05NaOH配制。

（2）双缩脲***：称以1.50克***铜（CuSO4?5H2O）和6.0克酒石酸钾钠（KNa***H4O6?4H2O），用500毫升水溶解，在搅拌下加入300毫升10% NaOH溶液，用水稀释到1升，贮存于塑料瓶中（或内壁涂以石蜡的瓶中）。此***可长期保存。若贮存瓶中有黑色沉淀出现，则需要重新配制。

原子数由m个氨基酸，n条肽链组成的蛋白质分子，至少含有n个—COOH，至少含有n个—NH2，肽键m-n个，O原子m+n个。分子质量设氨基酸的平均相对分子质量为a，含b个二硫键，蛋白质的相对分子质量=ma-18(m-n)-2b***控制***中的核苷酸 6信使RNA中的核苷酸 3蛋白质中氨基酸 1。蛋白质是由C（碳）、H（氢）、O（氧）、N（氮）组成，一般蛋白质可能还会含有P（磷）、S（硫）、Fe（铁）、Zn（锌）、Cu（铜）、B（硼）、Mn（锰）、I（碘）、Mo（钼）等。这些元素在蛋白质中的组成百分比约为：碳50% 氢7% 氧23% 氮16% 硫0~3% 其他微量。

（1）一切蛋白质都含氮元素，且各种蛋白质的含氮量很接近，均为16%；

（2）蛋白质系数：任何生物样品中每1g元氮的存在，就表示大约有100/16=6.25g蛋白质的存在， 6.25常称为蛋白质常数。