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小分子类物质包含多肽、天然小分子、化学合成小分子等一系列的物质，被广泛用于medicine等各个领域。以往小分子的定量检测主要通过气相和液相色谱完成，存在周期长，检测仪器价格昂贵等多方面的不足。那么immune检测技术可以用于定量检测小分子吗？

免1疫检测试剂盒的技术基础就是抗原和抗1体的特异性结合，小分子特异性抗1体的制备即是小分子immune检测试剂盒制备的关键之处。小分子由于分子量小，结构简单，在免1疫学上划归为半抗原（Hapten），即只有immune反应性而没有immune原性的一类物质，不能直接刺激机体产生antibody但是却拥有和antibody结合的特性。随着抗1体制备技术的发展，小分子特异性抗1体的制备技术显得更为多元化

如何评价和选择支原体检测试剂盒

1. 灵敏度。

灵敏度常用支原体基因组的拷贝数或支原体菌株的CFU表示。

2. 特异性和广谱性。

质量好的试剂盒应检测的支原体物种越多越多，并且特异性强，即只针对支原体，不针对其他细菌等微生物，没有交叉反应。

3. 稳定性。

冻干粉比液体试剂的稳定性高。

4. 样本类型及样本处理。

一款好的试剂盒，会标出它适合的样本类型，也会说明如何处理样本。要注意有的样本含有抑制PCR反应的物质，因此需要处理。

5. 对照品。

一个好的试剂盒，会带有阳性对照和内控对照。内控对照是用于监测PCR是否正常。如果样本含有抑制PCR的物质，则内控对照的条带会发生缺失。有严重支原体污染的样本由于样本中的支原体对内控对照产生了竞争性抑制，因此支原体条带越强，内控条带越弱

RNA抽取一般使用Trizol法抽提:

Trizol是一种总RNA抽提试剂，内含异硫qing酸胍等物质，能迅速裂解细胞，抑制细胞释放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法进行提取组织或细胞中的RNA。

Trizol作用原理:

在匀质化或溶解样品中，Trizol试剂可保持RNA的完整性，同时能破坏细胞及溶解细胞成分。加入氯1仿离心后，裂解液分层成水相和有机相。RNA存在于水相中。

水相转移后，RNA通过异丙1醇沉淀回收。移去水相后，用乙醇可从中间相沉淀得到DNA，加入异丙1醇沉淀可从有机相得到蛋白质。

用乙醇沉淀DNA时为什么一定要加NaAc或NaCl

　　在pH为8左右的溶液中，DNA分子是带负电荷的，加一定浓度的NaAc或NaCl，使Na+中和DNA分子上的负电荷， 减少DNA分子之间的同性电荷相斥力，易于互相聚合而形成DNA钠盐沉淀，当加入的盐溶液浓度太低时， 只有部分DNA形成DNA钠盐而聚合，这样就造成DNA沉淀不完全，当加入的盐溶液浓度太高时， 其效果也不好。在沉淀的DNA中，由于过多的盐杂质存在，影响DNA的酶切等反应，必须要进行洗涤或重沉淀。

　　加核糖核酸酶降解核糖核酸后，为什么再要用SDS与KAc来处理?

　　加进去的RNase本身是一种蛋白质，为了纯化DNA，又必须去除之，加SDS可使它们成为SDS-蛋白复合物沉淀，再加KAc使这些复合物转变为溶解度更小的钾盐形式的SDS-蛋白质复合物，使沉淀更加完全。也可用饱和酚、*抽提再沉淀，去除RNase。在溶液中，有人以KAc代替NaAc，也可以收到较好效果。

　　在基因操作实验中，磷酸盐缓冲系统(pKa=7.2)和硼酸系统(pKa=9.24)等虽然也都符合细胞内环境的生理范围(pH)，可作DNA的保存液，但在转化实验时，磷酸根离子的种类及数量将与Ca2+产生Ca3(PO4)2沉淀，在DNA反应时，不同的酶对辅助因子的种类及数量要求不同，有的要求高离子浓度，有的则要求低盐浓度，采用Tris-HCl(pKa=8.0)的缓冲系统，由于缓冲液是TrisH+/Tris，不存在金属离子的干扰作用，故在提取或保存DNA时，大都采用Tris-HCl系统，而TE缓冲液中的EDTA更能稳定。