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基于***工程技术制备小分子特异性antibody

通过大量的实验发现，小分子的偶联物并不是不能产生特异性针对小分子的抗1体，而是效价过低，不满足制备多克1隆抗1体和单克1隆抗1体的需要，但是***工程手段为制备该类型小分子特异性antibody提供了新的思路。该技术的核心在于制备antibody的***文库，通过噬菌体展示技术、核糖体展示技术等获取antibody的目的***，再利用蛋白表达系统制备重组antibody或者改造antibody，以获取针对小分子的特异性antibody。目前随着antibody***测序信息的公布和完善，为人工设计antibody提供了基础，这也会以后小分子特异性antibody的制备提供了新的途径。

EXBio的T淋巴细胞增殖反应检测***盒（T-cell BlastoFlowEx Kit）#ED7642 旨在测量活化的全血样本中T淋巴细胞的增殖反应。 该***盒使用抗CD3和抗Ki67抗1体混合物检测增殖的淋巴细胞。

T淋巴细胞增殖反应检测***盒实验流程：

1.从培养箱中取出试管，取下并丢弃管盖。每管中加入25 ul EDTA溶液，混合。

2.在37℃下孵育10分钟。

3.加入2ml的PBS，混合。400g离心细胞5分钟，移除上清液。

4.轻轻摇动管子扰乱沉淀。加入2ml的稀释固定和裂解溶液，混合。室温下孵育10分钟。

5.400g离心细胞5分钟，移除上清液。

6.加入0.5ml稀释的破膜溶液，混合。室温下孵育10分钟。

7.加入2ml的PBS。400g离心细胞5分钟，移除上清液。

8.加入50 ul的CD3/Ki-67 PE抗1体预混液，混匀，室温下孵育至少30分钟。

9.加入2ml PBS。400g离心细胞5分钟，移除上清液。

10.用0.1-0.3ml的1％甲醛PBS溶液或者稀释的固定和裂解液（1份固定裂解液液+9份PBS的缓冲液）重悬细胞。在2-8℃下暗室条件下储存处理后的样品，直到分析。

总RNA的抽提方法:

目前常用的方法是用异硫qing酸胍苯1酚抽提法。

提取步骤:

先用液氮研磨材料，匀浆，加入Trizol***，进一步破碎细胞并溶解细胞成分。然后加入氯1仿抽提，离心，分离水相和有机相，收集含有RNA的水相，通过异丙1醇沉淀，获得比较纯的总RNA,用于下一步mRNA的纯化。也可将含有RNA样品的细胞破碎液通过硅胶膜纯化柱纯化。

RNA浓度和纯度判断:

OD260为1时相当于浓度为50 ug/mL;

OD260/0D280值在1.8~ 2.0之间，表示纯度较好;

0D260/OD280值低于1.8，样品有蛋白质或酚污染;

0D260/0D280值大于2.0，提取的RNA可能有降解;

电泳后如果rRNA大小完整，而且28S rRNA和18SrRNA亮度接近2:1、mRNA分布均匀，则认为RNA。

DNA提取过程中各种***的作用及原理

　　溶液I—溶菌液：

　　溶菌酶：它是糖苷水解酶，能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键，因而具有溶菌的作用。当溶液中pH小于8时，溶菌酶作用受到***。

　　葡萄糖：增加溶液的粘度，维持渗透压，防止DNA受机械剪切力作用而降解。

　　EDTA：

　　(1)螯合Mg2+、Ca2+等金属离子，***脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用(DNase作用时需要一定的金属离子作辅基);

　　(2)EDTA的存在，有利于溶菌酶的作用，因为溶菌酶的反应要求有较低的离子强度的环境。