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传统小分子特异性antibody制备技术

为解决小分子这类半抗原物质无法刺激宿主动物产生antibody的特性，必须将半抗原回复完全抗原的特性。解决这个问题可以通过将小分子和对宿主动物immune原性很强的物质：如OVA、BSA、KLH等偶联，将其制备成完全抗原，通过immune宿主动物，便能促使宿主动物产生针对小分子的特异性antibody，这类antibody通过抗原特异性的筛选便能获取目的antibody。目前，通过此项技术能解决绝大多数小分子特异性antibody的制备，但是也可能由于小分子的结构特异，偶联物和偶联方式的选取、偶联率的差异以及immune技术有待发展等多方面的因素使其特异性antibody的制备存在困难。

tRNA二级结构

约50%碱基配对，形成四段双螺旋，与五段非配对序列形成三叶草形结构。

该结构中存在四臂四环：

①氨基酸臂。 

②二氢尿***H4N2臂（DHU臂、D臂）和二氢尿***H4N2环（DHU环、D环），特征是含二氢尿***H4N2（DHU、D）。 

③反密码子臂和反密码子环，特征是反密码子环含反密码子。反密码子5′端与尿苷酸连接，3′端与piao呤核苷酸连接。TΨC臂（T臂）和TΨC环（Ψ环），特征是TΨC环含胸腺***H4N2核糖核苷酸T54假尿苷酸Ψ55胞苷酸C56。

④额外环3~21nt。

tRNA三级结构呈L形，氨基酸结合位点位于其一端，反密码子环位于其另一端，DHU环和TΨC环虽然在二级结构中位于两侧，但在三级结构中却相邻。尽管各种tRNA的长度和序列不尽相同，但其三级结构相似，提示三级结构与其功能密切相关。

RNA抽取一般使用Trizol法抽提:

Trizol是一种总RNA抽提***，内含异硫qing酸胍等物质，能迅速裂解细胞，***细胞释放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法进行提取***或细胞中的RNA。

Trizol作用原理:

在匀质化或溶解样品中，Trizol***可保持RNA的完整性，同时能***细胞及溶解细胞成分。加入氯1仿离心后，裂解液分层成水相和有机相。RNA存在于水相中。

水相转移后，RNA通过异丙1醇沉淀回收。移去水相后，用乙醇可从中间相沉淀得到DNA，加入异丙1醇沉淀可从有机相得到蛋白质。