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公司地址: | 湖北武汉市洪山区野芷湖西路16号创意天地办公04栋701 |
发布时间:2022-01-17 11:02:18
EXBio的T淋巴细胞增殖反应检测***盒(T-cell BlastoFlowEx Kit)#ED7642 旨在测量活化的全血样本中T淋巴细胞的增殖反应。 该***盒使用抗CD3和抗Ki67抗1体混合物检测增殖的淋巴细胞。
T淋巴细胞增殖反应检测***盒实验流程:
1.从培养箱中取出试管,取下并丢弃管盖。每管中加入25 ul EDTA溶液,混合。
2.在37℃下孵育10分钟。
3.加入2ml的PBS,混合。400g离心细胞5分钟,移除上清液。
4.轻轻摇动管子扰乱沉淀。加入2ml的稀释固定和裂解溶液,混合。室温下孵育10分钟。
5.400g离心细胞5分钟,移除上清液。
6.加入0.5ml稀释的破膜溶液,混合。室温下孵育10分钟。
7.加入2ml的PBS。400g离心细胞5分钟,移除上清液。
8.加入50 ul的CD3/Ki-67 PE抗1体预混液,混匀,室温下孵育至少30分钟。
9.加入2ml PBS。400g离心细胞5分钟,移除上清液。
10.用0.1-0.3ml的1%甲醛PBS溶液或者稀释的固定和裂解液(1份固定裂解液液+9份PBS的缓冲液)重悬细胞。在2-8℃下暗室条件下储存处理后的样品,直到分析。
RNA病毒检测***盒用于定性检测和分析RNA病毒和RNA分子,特别适合检测病毒等此类病毒。
组分1. ConviFlex? RT-Taq Mix的冻干粉包含:MuLV逆转录酶、Taq聚合酶及dNTP。
其中MuLV逆转录酶,来自小鼠白血1病病毒(M-MuLV)并经过***修饰。
这里的Taq聚合酶另兼具热启动功能。
此Taq酶在室温下,活性被抗1体所***,当温度达到70°C以上时,才会被完全激1活。
在70°C 以下时,由于Taq酶没有完全活化,因此实验不会产生非特异性PCR产物和引物二聚体。热启动Taq酶的使用可使PCR具有更高的特异性和灵敏度。
用乙醇沉淀DNA时为什么一定要加NaAc或N***
在pH为8左右的溶液中,DNA分子是带负电荷的,加一定浓度的NaAc或N***,使Na+中和DNA分子上的负电荷, 减少DNA分子之间的同性电荷相斥力,易于互相聚合而形成DNA钠盐沉淀,当加入的盐溶液浓度太低时, 只有部分DNA形成DNA钠盐而聚合,这样就造成DNA沉淀不完全,当加入的盐溶液浓度太高时, 其效果也不好。在沉淀的DNA中,由于过多的盐杂质存在,影响DNA的酶切等反应,必须要进行洗涤或重沉淀。
加核糖核酸酶降解核糖核酸后,为什么再要用SDS与KAc来处理?
加进去的RNase本身是一种蛋白质,为了纯化DNA,又必须去除之,加SDS可使它们成为SDS-蛋白复合物沉淀,再加KAc使这些复合物转变为溶解度更小的钾盐形式的SDS-蛋白质复合物,使沉淀更加完全。也可用饱和酚、*抽提再沉淀,去除RNase。在溶液中,有人以KAc代替NaAc,也可以收到较好效果。
在***操作实验中,磷酸盐缓冲系统(pKa=7.2)和硼酸系统(pKa=9.24)等虽然也都符合细胞内环境的生理范围(pH),可作DNA的保存液,但在转化实验时,磷酸根离子的种类及数量将与Ca2+产生Ca3(PO4)2沉淀,在DNA反应时,不同的酶对辅助因子的种类及数量要求不同,有的要求高离子浓度,有的则要求低盐浓度,采用Tris-HCl(pKa=8.0)的缓冲系统,由于缓冲液是TrisH+/Tris,不存在金属离子的干扰作用,故在提取或保存DNA时,大都采用Tris-HCl系统,而TE缓冲液中的EDTA更能稳定。
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