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农bacillus转化法

　　农bacillus包括引起植物冠瘿瘤的根***农bacillus和引起发根病的发根农杆1菌。根***农杆1菌和发根农bacillus有相似的遗传背景。在农bacillus介导的转化中，80%左右是由根***农bacillus介导的，大约20%是由发根农bacillus介导的。这里主要介绍根***农杆1菌介导的转化。

　　根***农bacillusTi质粒上有一段转移DNA（T-DNA）和Vir区，在农bacillus侵染植物时，这段T-DNA可以插入到植物***组中，使其携带的***在植物中得以表达。Vir区共24个***，它们表达的蛋白与T-DNA的加工和转移有关。

腺病毒载体的构建经历了体外直接连接、包装细胞内重组、***内重组、位点特异性重组4个发展阶段，同时随着分子生物学技术的发展，改进的体外连接法又得到应用。

体外连接法。这种方法需要全长腺病毒***组和一个含腺病毒***组左末端序列的质粒，包括左端反向末端重复(Inverted terminal repeat,ITR)、包装信号和E1A的增强子序列。将目的***克1隆到质粒的病毒序列下游，ClaI酶切获得含目的***的***组左末端，连接到ClaI酶解的野1生型腺病毒***组(ClaI在病毒***组仅有一个酶切位点，位于E1A***内部)，将得到的含目的***的的***组DNA直接转染包装细胞293，产生重组病毒颗粒。这种方法需要培养野1生型腺病毒以提取病毒***组，能够使用的酶切位点仅有一个，连接效率低，而且仅删除了部分E1A***，外源***载量有限，所以现已淘汰不用。

***导入细胞常用方法

　　 噬菌体进入宿主***，病毒进入宿主细胞中繁殖就是感1染（infection）。用经人工改造的噬菌体活病毒作载体，以其DNA与目的序列重组后，在体外用噬菌体或病毒的外壳蛋白将重组DNA包装成有活力的噬菌体或病毒，就能以infection的方式进入宿主***或细胞，使目的序列得以copy繁殖。infection的效率很高，但DNA包装成噬菌体或病毒的操作较麻烦。　

20世纪50年代以后，随着分子遗传学的发展，尤其是沃森和克里克提出DNA双螺旋结构以后，人们进一步认识了***的本质，即***是具有遗传效应的DNA。研究结果还表明，每条染色体只含有1～2个DNA分子，每个DNA分子上有多个***，每个***含有成百上千个脱氧核苷酸。自从RNA病毒发现之后，***的存在方式不仅仅只存在于DNA上，还存在于RNA上。由于不同***的脱氧核糖核苷酸的排列顺序（碱基序列）不同，因此，不同的***就含有不同的遗传信息。1994年中科院曾邦哲提出系统遗传学概念与原理，探讨猫之为猫、虎之为虎的***逻辑与语言，提出***之间相互关系与***组逻辑结构及其程序化表达的发生研究。