腺病毒载体系统询问报价「多图」

腺病毒载体的构建经历了体外直接连接、包装细胞内重组、***内重组、位点特异性重组4个发展阶段，同时随着分子生物学技术的发展，改进的体外连接法又得到应用。

体外连接法。这种方法需要全长腺病毒***组和一个含腺病毒***组左末端序列的质粒，包括左端反向末端重复(Inverted terminal repeat,ITR)、包装信号和E1A的增强子序列。将目的***克1隆到质粒的病毒序列下游，ClaI酶切获得含目的***的***组左末端，连接到ClaI酶解的野1生型腺病毒***组(ClaI在病毒***组仅有一个酶切位点，位于E1A***内部)，将得到的含目的***的的***组DNA直接转染包装细胞293，产生重组病毒颗粒。这种方法需要培养野1生型腺病毒以提取病毒***组，能够使用的酶切位点仅有一个，连接效率低，而且仅删除了部分E1A***，外源***载量有限，所以现已淘汰不用。

位点特异性重组法

这类方法使用来源于噬菌体的重组酶，这类重组酶能够识别特异性序列位点(长度数十碱基对至数百碱基对)并引发含有该位点的序列之间的重组；在腺病毒骨架和穿梭质粒中添加重组酶能够识别的特异性位点，在细胞内表达对应的噬菌体重组酶或体外使用重组酶，介导骨架质粒和穿梭质粒之间的位点特异性重组，将目的***引入骨架质粒，形成带有重组腺病毒***组的腺病毒质粒；转染包装细胞，进行病毒载体拯救。该方法进一步简化了腺病毒质粒的制备过程，它的缺限是在腺病毒***组的某些部位不可避免的残留了重组酶特异性识别位点。

腺病毒的研究简史

腺病毒对啮齿类动物有致***能力，或能转化体外培养的啮齿类动物细胞。使细胞转化只需要腺病毒***组的一部分，这些***位于***组的左端，约占整个***组的7%～10%。尽管腺病毒分布很广，但对***不出现致***性。***细胞是一类允许细胞(permissive cell)，即这类细胞允许感1染入1侵的病毒在细胞内copy增殖，***后细胞裂解died而释放出大量1子代病毒。在体外培养的多种***肿1瘤细胞中均未查出腺病毒颗粒，但在人的1号染色体上有adl2的整合位点，这意味着***细胞对于腺病毒也可能是非允许细胞，即这类细胞在病毒感1染后，病毒不能在细胞内copy增殖，但可整合在受感1染细胞的***组内。这些细胞被病毒转化，表型发生改变，且可在体外期地培养传代。    

20世纪初孟德尔的工作被重新发现以后，他的定律又在许多动植物中得到验证。1909年丹麦学者W.L.约翰森提出了***这一名词，用它来指任何一种生物中控制任何性状而其遗传规律又符合于孟德尔定律的遗传因子，并且提出***型和表现型这样两个术语，前者是一个生物的***成分，后者是这些***所表现的性状。

1910年美国遗传学家兼胚胎学家T.H.摩尔根在果蝇中发现白色复眼（white eye, W）突变型，首先说明***可以发生突变，而且由此可以知道型***W+具有使果蝇的复眼发育成为红色这一生理功能。1911年摩尔根又在果蝇的X连锁***白眼和短翅两品系的杂交子二代中，发现了白眼、短翅果蝇和正常的红眼长翅果蝇，首先指出位于同一染色体上的两个***可以通过染色体交换而分处在两个同源染色体上。交换是一个普遍存在的遗传现象，不过直到20世纪40年代中期为止，还从来没有发现过交换发生在一个***内部的现象。因此当时认为一个***是一个功能单位，也是一个突变单位和一个交换单位。