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聚合酶链式反应（PCR）是一种用于放大扩增特定的DNA部分片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA copy，PCR的***大特点是能将微量的DNA大幅增加。因此，无论是化石中的古生物、历史人物的残骸，还是几十年前凶1杀案中凶1手所遗留的毛发、皮肤或血液，只要能分离出一丁点的DNA，就能用PCR加以放大，进行比对。这也是“微量证据”的威力之所在。由1983年美国Mullis首先提出设想，1985年由其发明了聚合酶链反应，即简易DNA扩增法，意味着PCR技术的真正诞生。到如今2013年，PCR已发展到第三代技术。1976年，中国科学家钱嘉韵，发现了稳定的Taq DNA聚合酶，为PCR技术发展也做出了基础性贡献。

PCR有哪些应用领域？

***表达

通常可通过PCR来检测不同细胞类型、***和生物体在特定时间点的***表达差异。首先，从目标样品中分离出RNA并将mRNA逆转录成cDNA。随后，通过由PCR扩增的cDNA数量，确定mRNA的初始水平。这一过程也被称为逆转录PCR。

终点PCR 可通过凝胶里的扩增产物条带强度对RNA的表达进行定量（一种半定量方法）。例如，对起始cDNA进行连续稀释并扩增。通过凝胶电泳使不同起始量的终点PCR得率可视化，然后对条带强度进行定量，并以管家***为参照进行标准化，预估扩增靶点的相对表达水平。如今，终点PCR已基本被实时PCR 或qPCR 取代了，因为它们可获得和的***表达定量结果。

 PCR反应五要素

参加PCR反应的物质主要有五种即引物(PCR引物为DNA部分片段,细胞内DNA复1制的引物为一段RNA链)、酶、dNTP、模板和缓冲液(其中需要Mg2+)。

[PCR步骤]标准的PCR过程分为三步:

1.DNA变性(90°C-96*C): 双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA

2.退火(25C-65'C): 系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链。

3.延伸(70°C-75*C): 在Taq酶(在72C左右，活性***佳)的作用下，以dNTP为原料，从引物的5'端→3'端延伸，合成与模板互补的DNA链。

每一循环经过变性、退火和延伸，DNA含量即增加一倍。现在有些PCR因为扩增区很短，即使Taq酶活性不是***佳也能在很短的时间内copy完成，因此可以改为两步法，即退火和延伸同时在60°C -65C间进行，以减少一次升降温过程，提

高了反应速度。

目前的病毒核酸检测***盒，多数采用荧光定量PCR方法，通过检测荧光信号的累积来确定样本中是否含有病毒核酸。那么，核酸检测到底需要经过哪些步骤呢？概括起来，是 取样、留样、保存、核酸提取和上机检测五个步骤。

取样

采集***的分泌物。用鼻咽拭子或咽拭子擦拭鼻腔或咽后壁及双侧扁桃体处

留样

将拭子头浸入细胞保存液中，折断尾部后立即旋紧管盖

保存

将样本管放入密封袋中保存好，并及时送检

核酸提取

将样本送进实验室进行核酸提取

上机检测

将提取物进行荧光PCR扩增反应