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营养条件

1．培养基细胞培养基包含细胞生长所需的各种营养物质，包括碳水化合物、氨基酸、无机盐、***等。针对不同细胞的营养需求，有多种合成培养基可供选择，如EBSS、Eagle、MEM、RPMll640、DMEM等。

2．其他添加成分在各种合成培养基提供基础营养物质之外，还需根据不同细胞和不同的培养目的添加其他成分，如血1清、因子等。

血1清提供的是细胞外基质、生长因子和转铁蛋白等重要物质，常用的是胎牛血1清。要根据不同的细胞和不同的研究目的决定添加血1清的比例。10%～20%的血1清能维持细胞较快的生长增殖速度，称为生长培养液；为维持细胞缓慢生长或不死，添加2%～5%的血1清即可，称为维持培养液。但血1清中也存在***于细胞生长和繁殖的物质，如补体、免1疫球蛋白和一些生长***因子；成分不明确，影响对结果的分析；不同动物、不同批次的血1清活性差别较大，影响培养效果的稳定性。

谷氨酰胺是细胞生长重要的氮源，在细胞生长代谢过程中起重要作用，但由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定容易降解，4℃下放置7天即可分解约50%，故谷氨酰胺需在使用前添加。

细胞传代

细胞密度达到80%~90%时．去培养基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0．25%EDTA的胰蛋白酶，放人细胞培养箱3min。加人1ml DMEM完全培养基终止胰酶消化，转移至15ml离心管。

加入10ml PBS清洗细胞培养盘，转移至15ml离心管，2000rpmX2min，弃上清液。再加入10ml PBS（经高压灭菌，保存于40C），吹匀，吸取10微升进行计数，按照1×106/盘接种，在含5%CO2的细胞培养箱继续培养。

iPS细胞的树立

利用***修饰技术，将已经失去了全能分化性的小鼠皮肤成纤维细胞改造成具备全能分化性的胚胎干1细胞，这种胚胎干1细胞可以进一步的诱导分化成各种各样的身体细胞，比如心肌细胞、视网1膜细胞等等。而这种细胞就称为iPS细胞（诱导性多功能干1细胞），因为是人工进行培养的细胞，因此又称为人工多功能性干1细胞。现已经可以通过***皮肤内的体细胞进行培育。

iPS细胞这一名词，全称为诱导性多能ips（induced pluripotent stem cell），缩写名来源于各个英文单词的首字母。

胚胎iPS的获取，不可避免的要严重的伤害乃至杀1死胚胎，这在很多***已经是***上的杀1人罪行了。所以，胚胎iPS的相关研究在各国都受到严格监管，实质上陷于停顿，而iPS细胞就不存在这样的伦1理问题，无需受精卵或胚胎，仅仅是提取一些体细胞，就可以将其转化为与胚胎iPS相同的多能细胞，可谓是巨大的进步了。