逆转录病毒滴度测定择优推荐 友名生物

脂质体法

　　是用带正电荷的脂质体作载体携带外源***，与带负电荷的细胞膜融合，把外源***导入细胞。用脂质体法转化原生质体，其毒性较电1击法和PEG法小，且适于运输大分子DNA穿过质膜。

　　Antonelli等（1990）用该法将***组DNA转入BMS玉米原生质体，获得转化了的再生愈伤***，转化率高达8%。

　　脂质体法的优点是转化受体为单个细胞，易于筛选，不易形成嵌合体，对于原生质体再生能力好的植物品种，是非常好的转化方法。

第yi代腺病毒载体：一般将E1或E3***缺失的腺病毒载体称为第yi代腺病毒载体，此类型载体在未经过纯化时可引发机体产生较强的炎1症反应和免1疫反应，纯化后可以安全使用，体内表达周期可达4周。

第二代腺病毒载体：E2A或E4***缺失的腺病毒载体被称为第二代腺病毒载体，产生的免1疫反应较弱其载体容量和安全性方面有所改进，但病毒包装难度和出毒和病毒滴度下降厉害，应用相当局限。

第三代腺病毒载体：第三代载体缺失了全部的（无病毒载体，gutless vector）或大部分腺病毒***（微型腺病毒载体，mini Ad），仅可保留ITR和包装信号序列。第三代腺病毒载体***大可插入35kb的***，病毒蛋白表达引起的细胞免1疫反应进一步减少，载体中引入核基质附着区***可使得外源***保持长期表达，并增加了载体的稳定性。这一载体系统需要一个腺病毒突变体作为辅助病毒。

***导入细胞常用方法

不同的载体在不同的宿主细胞中繁殖，导入细胞的方法也不相同。

由于外源DNA的进入而使细胞遗传性改变称为转化，早在1943年，***ery等就发现***肺1炎双球菌的DNA与***肺1炎双球菌共培养后产生***性的肺1炎双球菌后代的转化现象。但DNA进入细胞的效率很低，在分子生物学和***工程工作中可采取一些方法处理细胞，经处理后的细胞就容易接受外界DNA，称为感受态细胞，再与外源DNA接触，就能提高转化效率。例如大肠杆1菌经冰冷C***2的处理，就成为感受态***，当加入重组质粒并突然由4℃转入42℃作短时间处理，质粒DNA就能进入***；用高电压脉冲短暂作用于***也能显著提高转化效率，这称为电穿孔（electroporation）转化法

　　 噬菌体进入宿主***，病毒进入宿主细胞中繁殖就是感1染（infection）。用经人工改造的噬菌体活病毒作载体，以其DNA与目的序列重组后，在体外用噬菌体或病毒的外壳蛋白将重组DNA包装成有活力的噬菌体或病毒，就能以infection的方式进入宿主***或细胞，使目的序列得以copy繁殖。infection的效率很高，但DNA包装成噬菌体或病毒的操作较麻烦。