血液RNA提取服务为先 友名生物

PCR方法已广泛用于科研，在工业中也有不断扩大应用的趋势，它包括检测一些病原体、检测支原体污染、检测***污染以及检测残留宿主DNA等。

PCR在工业中的应用主要存在一个方法验证的问题，尤其是灵敏度的验证。灵敏度不够，就会发生漏检。另外，PCR所直接面对的样本是DNA，而非病原菌或DNA，因此还需要做DNA抽提，这也是要注意的。

因此，如能采用PCR检测支原体并替代药典方法，还是能节省很多时间和精力。但PCR方法的验证需要较为完整。灵敏度验证是一个重要方面。灵敏度不够，就会发生漏检。《欧洲药典》第2.6.7章（EP 2.6.7）和《日本药典》第十七版第G3章（JP G3），都规定，对于核酸扩增法（如PCR）检测支原体，如替代传统的培养法，都要求检测限达到10 CFU/ml。

具体验证可使用10CFU的支原体灵敏度标准品，它一般为冻干粉形式，需要用待测样本的样本基质（需保证里面不含支原体）来复溶，再进行DNA抽提以及PCR检测。如检测的电泳有条带，或者qPCR检测后的Ct值小于40，即表明检测成功。

DNA提取***盒是根据氯化芐法构建的，能够从样本中提取***组DNA的***盒。氯化1苄具有能将含有纤维素等的细胞壁中的羟基苄基化，从而***细胞壁的特性。本制品利用了氯化1苄的这一特性，将植物样品***融解后，再使用Pipet Tip的尖1端将植物样品在Microtube壁上数次按压即可***细胞壁。本法与传统方法相比，省去了液氮研磨等烦琐步骤，有利于一次性处理大量样品。而且，本制品经过了改良，热处理时间只需15分钟，使用本制品从实验开始至水相回收只需30分钟时间。得到的***组DNA可以进行PCR扩增及限制酶处理等。

DNA提取***盒主要可以分为以下几大类：小量全血***组DNA提取***盒、中量全血***组DNA提取***盒、***/细胞***组DNA提取***盒、中量/大量***/细胞***组DNA提取***盒、全血/***/细胞***组DNA提取***盒、CTAB植物***DNA提取***盒、新型植物***组DNA提取***盒、酵母***组DNA提取***盒、M13噬菌体单链***组DNA提取***盒。

从动物***中提取***组DNA

使用研钵进行匀浆时：

① 取1～100 mg的动物***或人***移入冰浴预冷的研钵中，快速用力展研成匀浆。注）下列***请加液氮研磨至粉末状。

A．富含DNA酶的胰脏、脾1脏、胸腺、淋巴等***。

B．富含胶原蛋白的皮肤、肌腱等***。

C．富含角质蛋白的***或坚硬的***（如骨骼）等。

② 加入650 μl的Solution A和0.9 μl的RNase A1，温和研磨30秒钟。注）使用上述①-注）的实验材料时，请在加入Solution A及RNase A1后，将研钵置于65℃水浴上研磨1分钟。

③ 收集650 μl研磨好的***匀浆液移至Collection Tube中。如果匀浆体积不足650 μl，请补充Solution A至650 μl，65℃保温5分钟。

使用研磨棒进行匀浆时:

① 取1～100 mg的动物***或人***移入冰浴预冷的Collection Tube 中，用研磨棒快速研磨成糊状。

② 加入350 μl的Solution A和0.9 μl的RNase A1后用研磨棒快速研磨成匀浆。

③ 加入350 μl的Solution A将研磨棒上的匀浆冲入Collection Tube中，充分振荡混合后，65℃保温5分钟。