通用DNA纯化欢迎来电「多图」

小分子类物质包含多肽、天然小分子、化学合成小分子等一系列的物质，被广泛用于medicine等各个领域。以往小分子的定量检测主要通过气相和液相色谱完成，存在周期长，检测仪器价格昂贵等多方面的不足。那么immune检测技术可以用于定量检测小分子吗？

免1疫检测***盒的技术基础就是抗原和抗1体的特异性结合，小分子特异性抗1体的制备即是小分子immune检测***盒制备的关键之处。小分子由于分子量小，结构简单，在免1疫学上划归为半抗原（Hapten），即只有immune反应性而没有immune原性的一类物质，不能直接刺激机体产生antibody但是却拥有和antibody结合的特性。随着抗1体制备技术的发展，小分子特异性抗1体的制备技术显得更为多元化

如何确认RNA的质量

实时荧光定量PCR技术是通过测定RNA的转录水平来评估***的活力。RNA样本提取的质量直接影响***表达分析。影响RNA品质的因素有以下三种：RNA浓度、RNA纯度和RNA完整性。

检测RNA浓度、纯度和完整性的方式主要有以下几种：

紫外分光光度计法：

测量260nm吸收值计算RNA浓度，测量260nm/280nm吸收值的比值，用于评估RNA纯度。需要注意的是：在检测核酸物质时应该在固定的PH溶液中进行。

260nm/280nm的比值范围在 1.9~2.1 之间。＜1.9，说明有蛋白质残留；＞2.1，说明RNA可能发生降解。

琼脂糖凝胶电泳：

完整的RNA通常有三条带，***亮的是28S条带，其次是18S条带，***淡的是5S条带（部分***盒提取时会过滤掉5S条带）。通过琼脂糖凝胶电泳可以检测28S和18S的比值。该方法主要用于检测RNA的纯度和完整性。

如果28S和18S条带明亮、清晰、条带锐利，28S的亮度在18S条带的两倍以上，我们认为RNA的质量***好。

若RNA条带出现弥散，原因可能：RNA被核酸酶降解、电压或电流过大、上样量过高或过低等。

DNA提取过程中各种***的作用及原理

　　溶液I—溶菌液：

　　溶菌酶：它是糖苷水解酶，能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键，因而具有溶菌的作用。当溶液中pH小于8时，溶菌酶作用受到***。

　　葡萄糖：增加溶液的粘度，维持渗透压，防止DNA受机械剪切力作用而降解。

　　EDTA：

　　(1)螯合Mg2+、Ca2+等金属离子，***脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用(DNase作用时需要一定的金属离子作辅基);

　　(2)EDTA的存在，有利于溶菌酶的作用，因为溶菌酶的反应要求有较低的离子强度的环境。

提取DNA常用的方法

　　一.酚抽提法：先用蛋酶K、SDS破碎细胞，消化蛋白，然后用酚和酚-氯DNA大小为100-150kb

　　二.甲酰胺解聚法：破碎细胞同上，然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合，再透析获得DNA可得DNA200kb左右。

　　三.玻璃棒缠绕法：用盐酸胍裂解细胞，将裂解物铺于乙醇上，然后用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅，DNA沉淀液绕于玻棒。生成DNA约80kb。

　　四.异丙1醇沉淀法：基本同1法，仅用二倍容积异丙1醇替代乙醇，可去除小分子RNA(在异丙1醇中可溶状态)

　　五.表面活性剂快速制备法：用Triton X-100A或NP40表面活性剂破碎细胞，然后用蛋白酶K或酚去除蛋白，乙醇沉淀或透析。

　　六.加热法快速制备：加热96℃-100℃，五分钟，然后离心后取上清，可用于PCR反应。

　　七.碱变性快速制备：先用NaOH作用20分钟，再加HCI中和，离心后取上清，含少量DNA。