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农bacillus转化法

　　农bacillus包括引起植物冠瘿瘤的根***农bacillus和引起发根病的发根农杆1菌。根***农杆1菌和发根农bacillus有相似的遗传背景。在农bacillus介导的转化中，80%左右是由根***农bacillus介导的，大约20%是由发根农bacillus介导的。这里主要介绍根***农杆1菌介导的转化。

　　根***农bacillusTi质粒上有一段转移DNA（T-DNA）和Vir区，在农bacillus侵染植物时，这段T-DNA可以插入到植物***组中，使其携带的***在植物中得以表达。Vir区共24个***，它们表达的蛋白与T-DNA的加工和转移有关。

脂质体法

　　是用带正电荷的脂质体作载体携带外源***，与带负电荷的细胞膜融合，把外源***导入细胞。用脂质体法转化原生质体，其毒性较电1击法和PEG法小，且适于运输大分子DNA穿过质膜。

　　Antonelli等（1990）用该法将***组DNA转入BMS玉米原生质体，获得转化了的再生愈伤***，转化率高达8%。

　　脂质体法的优点是转化受体为单个细胞，易于筛选，不易形成嵌合体，对于原生质体再生能力好的植物品种，是非常好的转化方法。

腺病毒载体的构建经历了体外直接连接、包装细胞内重组、***内重组、位点特异性重组4个发展阶段，同时随着分子生物学技术的发展，改进的体外连接法又得到应用。

体外连接法。这种方法需要全长腺病毒***组和一个含腺病毒***组左末端序列的质粒，包括左端反向末端重复(Inverted terminal repeat,ITR)、包装信号和E1A的增强子序列。将目的***克1隆到质粒的病毒序列下游，ClaI酶切获得含目的***的***组左末端，连接到ClaI酶解的野1生型腺病毒***组(ClaI在病毒***组仅有一个酶切位点，位于E1A***内部)，将得到的含目的***的的***组DNA直接转染包装细胞293，产生重组病毒颗粒。这种方法需要培养野1生型腺病毒以提取病毒***组，能够使用的酶切位点仅有一个，连接效率低，而且仅删除了部分E1A***，外源***载量有限，所以现已淘汰不用。

腺病毒的研究简史

腺病毒对啮齿类动物有致***能力，或能转化体外培养的啮齿类动物细胞。使细胞转化只需要腺病毒***组的一部分，这些***位于***组的左端，约占整个***组的7%～10%。尽管腺病毒分布很广，但对***不出现致***性。***细胞是一类允许细胞(permissive cell)，即这类细胞允许感1染入1侵的病毒在细胞内copy增殖，***后细胞裂解died而释放出大量1子代病毒。在体外培养的多种***肿1瘤细胞中均未查出腺病毒颗粒，但在人的1号染色体上有adl2的整合位点，这意味着***细胞对于腺病毒也可能是非允许细胞，即这类细胞在病毒感1染后，病毒不能在细胞内copy增殖，但可整合在受感1染细胞的***组内。这些细胞被病毒转化，表型发生改变，且可在体外期地培养传代。