腺病毒提取咨询***「友名生物」

典型的腺病毒载体系统如：穿梭质粒pCA13/腺病毒***组质粒pBHG11/包装细胞293细胞。pCA13/的HCMV IE启动子－多克1隆位点－SV40 AN（poly A）构成外源***的表达盒，该表达盒的插入使腺病毒E1***缺失，但是保留其两端侧翼序列（左侧的1~3bp的ITR，右侧从3.5kb到末端的维持病毒装配和活力必须的蛋白IX的***），也保留了腺病毒的包装信号

φ（194~358bp）；pBHG11则保留了腺病毒***组的绝大部分，但是缺失了包装信号φ、0.5~3.7图距（mu）部分的E1区、77.5～86.2mu的E3区，293细胞是整合有Ad5 E1***的人胚shen细胞系。pBHG11因为缺失包装信号及E1区而不能copy，pCA13带有包装信号及E1的侧翼序列，但是缺失E1区及腺病毒绝大部分***组，同样不能copy。外源目的***插入pCA13后，与pBHG11共转染，进入293细胞。pCA13与pBHG11在细胞内发生同源重组，同时，293细胞提供E1蛋白，从而包装产生腺病毒颗粒。该病毒的蛋白质外壳同野1生型腺病毒相似，具有同样的感1染力进入靶1细胞的能力，但是***组DNA的E1区被外源目的***取代，即进入靶1细胞后病毒不能copy，但可以表达目的蛋白。

腺病毒是无胞膜的线性双链DNA病毒，目前腺病毒科分为5个属，有多种型别的腺病毒已经被开发为***转移载体，在基础科研、***cure和载体疫1苗领域得到广泛应用。

腺病毒的***组长约26-46kb，这使得腺病毒载体的构建与常见质粒载体(一般长度小于10kb)不同。太长的***组使得在腺病毒载体上富集一个多克1隆位点非常困难。针对重组腺病毒的构建，开发了多种方法。

目前已有的腺病毒载体系统均存在缺陷，有些构建步骤繁琐，耗时较长，有些在重组病毒中引入了不必要的外源序列，有些不能用于重组腺病毒的反向遗传改造。近年来，新的生物特性不同的腺病毒不断被发现，因此，本领域对构建过程更加快捷简便的、人工改造更加方便灵活的腺病毒载体系统和重组病毒构建方法存在需求。

腺病毒的结构

腺病毒含13%DNA和87%的蛋白质，病毒体分子量约为175×106。病毒***组为线状双链DNA，大约含35kb～36kb，腺病毒12、18和31型的DNA组成中，G+C mol%***低（48%～49%），属于对动物具有高致***性***型。腺病毒1、2、4、5、8等型的G+C mol%较高（61%），致***性反而低或无。这是一种用于人腺病毒分离株的分组的标准，根据其***同源性将人腺病毒分为A～F等6组。

***有两个特点：一是能忠实地自己，以保持生物的基本特征；二是在繁衍后代上，***能够“突变”和变异，当受精卵或母体受到环境或遗传的影响，后代的***组会发生***缺陷或突变。绝大多数产生***，在特定的环境下有的会发生遗传。也称遗传病。在正常的条件下，生命会在遗传的基础上发生变异，这些变异是正常的变异。***的与表达含特定遗传信息的核苷酸序列，是遗传物质的小功能单位。除某些病毒的***由核糖核酸（RNA）构成以外，多数生物的***由脱氧核糖核酸（DNA）构成，并在染色体上作线状排列。***一词通常指染色体***。在真核生物中，由于染色体在细胞核内，所以又称为核***。位于线粒体和叶绿体等细胞器中的***则称为染色体外***、核外***或细胞质***，也可以分别称为线粒体***、质粒和叶绿体***